ALSTEM逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮沉淀手冊(cè)

ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

Retrovirus Precipitation Solution: #VC200

逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案：＃VC200

描述

逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液是為逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒沉淀而優(yōu)化的聚合物混合物。它為濃縮逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒提供了一種簡(jiǎn)單，快速和的方法。在這個(gè)簡(jiǎn)單的方案中，您只需將逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液與逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液混合，孵育一小段時(shí)間，然后在標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)混合物。您可以將您的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度提高至4倍，并且無需超速離心即可獲得的回收率。逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案是一種5x解決方案。

特征

• 易于使用：簡(jiǎn)單混合
• 不需要超速離心
• 輕松擴(kuò)展大容量
• 濃度增加高達(dá)100倍
• 經(jīng)濟(jì)有效的旋轉(zhuǎn)方案，有效的病毒濃度
• 無毒：對(duì)包括ES細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞系都是安全的

• 概觀

逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液是優(yōu)化用于逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒沉淀的聚合物混合物。它為濃縮逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒提供了一種簡(jiǎn)單，快速和的方法。在簡(jiǎn)單的方案中，您只需將逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液與逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液混合，孵育一小段時(shí)間，然后在標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)混合物。您可以將您的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度提高至4倍，并且無需超速離心即可獲得的回收率。逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案是一種5x解決方案。

逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮沉淀手冊(cè)

• 程序

1.將含有逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的培養(yǎng)基從平板轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并以300×g離心培養(yǎng)基10分鐘以除去細(xì)胞碎片。

2.通過0.45μm過濾器過濾上清液。

3.將過濾的上清液轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并向每4體積含逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清液中加入1體積的冷逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液（4℃）。（實(shí)施例：5ml逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合并冷藏3小時(shí)至過夜。與逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀溶液混合的含逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清液在4°C下可穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4天。

5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鐘。離心后，逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒可在容器底部顯示為米色或白色顆粒。

6.丟棄上清液。通過以1500×g離心5分鐘來旋轉(zhuǎn)殘留溶液。通過抽吸去除所有液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。

7.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。

8.在低溫小瓶中分裝并儲(chǔ)存在-80°C直至準(zhǔn)備使用。

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