上海起發脂多糖提取試劑盒等你來拿！

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LPS Extraction Kit 脂多糖提取試劑盒 

iNtRON17141     100 Prep

脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌外膜的主要成分。其功能包括抗吞噬、抗血清、外膜通透性屏障和作為某些噬菌體吸附受體。熱酚水提取法是提取脂多糖的常用方法，但提取時間長，步驟復雜。當我們試圖操縱如此少量的細胞時，這種方法有很大的局限性。LPS提取試劑盒是專為快速、簡便地從細菌細胞中提取LPS而設計的，廣泛適用于不同的革蘭氏細菌，適合于細胞數量較少的情況。首先。細菌細胞被有機溶液溶解。細胞膜的磷脂和蛋白質成分被破壞，細胞成分在溶液中釋放。第二步。用高鹽濃度溶液純化釋放細胞組分中的脂多糖。第三步。對于高質量的脂多糖，洗滌和洗脫鹽通過洗滌步驟被簡單地除去 。

•廣泛應用于不同的革蘭氏陰性菌中

•僅需60分鐘即可提取出脂多糖

•可重復地獲得較高的脂多糖產量 

儲存：

在4℃下儲存，然后穩定至少一年。 

試劑盒包含：

LPS Extraction Kit       100 Preps
Lysis Buffer             100 ml Purification Buffer 80 ml

使用前配制溶液 ：

70%乙醇，

室溫10mmTris-HCl緩沖液（pH8.0）

蛋白酶K溶液（30∏/ml）

LPS提取率與培養體積成正比當使用5ml培養物時，LPS的產率達到大值。我們不建議處理超過5毫升的細菌培養物。如果使用過量的培養液，將降低裂解率和產量，增加細胞蛋白對脂多糖的污染。通常，在OD600為0.8-1.2時，宜培養體積為2毫升。

為從細菌細胞中獲得高純度的脂多糖，用蛋白酶K處理，按以下步驟提取脂多糖。 

協議：

1.在13000轉/分鐘的室溫下離心，獲得2-5毫升細菌細胞。注意：清除上清液的所有痕跡。對于成粒細胞，在使用前通過重復敲擊試管*松開細胞顆粒。細胞顆粒的不*松動可能導致無效的溶解和降低產量。

2。加入1毫升裂解緩沖液，用力旋渦。注：為促進細菌細胞溶解，應大力旋渦直至細胞團消失。

3。加入200毫升氯方后，用力旋渦10-20秒。室溫下孵育5分鐘，注意：旋渦前觀察試管。當加入氯方時，當氯方層向下移動時，會在上層（藍色層）的正下方形成一條白線。這個區域包含細胞碎片、蛋白質、基因組DNA和RNA的混合部分。加入氯方的目的是分離酚層和水層，并終分離RNA和基因組DNA/蛋白質。

4。以13000轉/分的轉速在4℃下離心10分鐘。將400毫升上清液移入新的1.5毫升試管中。注：上層移液時，注意形成白色沉淀物。

5。加入800ml純化緩沖液，充分混合。在-20℃下孵育10分鐘。注：本步驟的目的是從細胞的其他提取物（如蛋白質、核酸、脂質等）中純化脂質6。在4℃下以13000轉/分的速度離心15分鐘后，除去上層以獲得LPS顆粒。7號。加入1毫升70%乙醇，倒置試管2-3次，洗滌脂多糖顆粒。將混合物在4℃13000轉/分下離心3分鐘。丟棄上層并干燥剩余的LPS顆粒。

注：這是一個清洗階段，用于去除雜質，如鹽等。在RT.8干燥顆粒。將30–50毫升10毫升Tris HCl緩沖液（pH 8.0）加入到LPS顆粒和渦流管或移液管中。將LPS煮沸2分鐘，使其*溶解。選擇：用蛋白酶K處理，從細菌細胞中提取高純度的LPS。每1個LPS處理2.5?蛋白酶K，在50℃孵育30分鐘。通常從大腸桿菌中提取30?LPS。         

 1.在13000轉/分鐘的室溫下離心，獲得2-5毫升細菌細胞。注意：清除上清液的所有痕跡。對于成粒細胞，在使用前通過重復敲擊試管*松開細胞顆粒。細胞顆粒的不*松動可能導致無效的溶解和降低產量。

2。加入1毫升裂解緩沖液，用力旋渦。注：為促進細菌細胞溶解，應大力旋渦直至細胞團消失。

3。加入200毫升氯方后，用力旋渦10-20秒。室溫下孵育5分鐘，注意：旋渦前觀察試管。當加入氯方時，當氯方層向下移動時，會在上層（藍色層）的正下方形成一條白線。這個區域包含細胞碎片、蛋白質、基因組DNA和RNA的混合部分。加入氯方的目的是分離酚層和水層，并終分離RNA和基因組DNA/蛋白質。

4。以13000轉/分的轉速在4℃下離心10分鐘。將400毫升上清液移入新的1.5毫升試管中。注：上層移液時，注意形成白色沉淀物。

5。加入800ml純化緩沖液，充分混合。在-20℃下孵育10分鐘。注：本步驟的目的是從細胞的其他提取物（如蛋白質、核酸、脂質等）中純化脂質

6。在4℃下以13000轉/分的速度離心15分鐘后，除去上層以獲得LPS顆粒。

7。加入1毫升70%乙醇，倒置試管2-3次，洗滌脂多糖顆粒。將混合物在4℃13000轉/分下離心3分鐘。丟棄上層并干燥剩余的LPS顆粒。

注：這是一個清洗階段，用于去除雜質，如鹽等。在RT.8干燥顆粒。將30–50毫升10毫升Tris HCl緩沖液（pH 8.0）加入到LPS顆粒和渦流管或移液管中。將LPS煮沸2分鐘，使其*溶解。選擇：用蛋白酶K處理，從細菌細胞中提取高純度的LPS。每1個LPS處理2.5?蛋白酶K，在50℃孵育30分鐘。通常從大腸桿菌中提取30?LPS。

Cell culture volume(OD600=1.0) 2?(109 cells)
Yield of LPS 30?
Amount of Proteinase K 75?(2.5?of 30㎎/ ml PK)