美國Activity Signaling公司重組抗Npas4兔單克隆抗體介紹

一、基礎信息

1. 核心產品參數  

- 貨號：AS-AB18A-100（100μl）、AS-AB18A-300（300μl）  

-英文名：Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名：重組抗Npas4兔單克隆抗體

- 品牌：Activity Signaling

- 宿主與類型：重組兔單克隆抗體，通過基因工程技術構建，避免動物個體差異  

- 形態與保存：液體形式，1mg/ml濃度溶于PBS，短期4℃保存，長期-20℃分裝凍存  

2. 靶標蛋白Npas4的生物學意義  

Npas4（Neuronal PAS Domain Protein 4）屬于bHLH-PAS轉錄因子家族，是神經元活動依賴性的即早基因（IEG）產物。其表達具有高度神經元特異性，僅在突觸活動激活后數分鐘內迅速上調，且持續時間短暫（約1-2小時），被認為神經元活性的黃金標志物。Npas4的核心功能包括：  

- 調控突觸可塑性：通過激活BDNF等下游基因，平衡興奮性與抑制性突觸（E/I平衡），參與學習記憶和恐懼消退。  

- DNA損傷修復：與NuA4復合物結合，在神經元活動誘導的DNA斷裂位點募集修復蛋白，維持基因組穩定性，延緩神經退行性變。  

- 晝夜節律調節：與BMAL1等時鐘基因互作，調控視交叉上核（SCN）對光信號的響應。  

- 疾病關聯：其異常表達與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關。  

二、作用原理

1. 抗體設計與制備  

該抗體通過重組DNA技術構建，具體流程包括：  

- 抗原篩選：以Npas4蛋白C端保守區域（人源氨基酸597-802）為免疫原，確保跨物種識別（小鼠、大鼠、人類）。  

- 單B細胞克隆：從免疫兔外周血分離特異性B細胞，測序獲取抗體可變區基因。  

- 哺乳動物細胞表達：將抗體基因導入HEK293細胞，通過無血清懸浮培養大規模生產，避免動物源污染。  

- 嚴格純化：經Protein A親和層析和SEC分子篩純化，純度>95%，內毒素水平<0.1EU/μg。  

2. 作用機制  

抗體通過雙價Fab片段特異性結合Npas4蛋白的PAS結構域，阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用，從而抑制轉錄活性。該結合具有高度選擇性：  

- 種屬交叉反應性：通過小鼠、大鼠及人類腦組織樣本驗證，在WB中均顯示單一87kDa條帶。  

- 亞細胞定位：免疫熒光（IF）實驗證實其與DAPI共定位，提示抗體可穿透細胞核膜，識別內源性Npas4。  

- 功能驗證：在Npas4基因敲除（KO）小鼠中無信號，證明抗體無交叉反應。

三、實驗痛點解決方案

1. 傳統抗體的局限性  

- 特異性不足：多克隆抗體因識別多個表位，易與PAS家族其他成員（如NPAS1、NPAS3）交叉反應，導致WB背景高或IHC假陽性。  

- 批次間差異：雜交瘤技術生產的小鼠單抗可能因細胞株遺傳漂變，導致不同批次效價波動。  

- 驗證困難：缺乏KO模型驗證的抗體難以排除非特異性結合，影響實驗結論可信度。  

2. 本產品的針對性優化  

- KO驗證黃金標準：在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無信號，排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應。  

- 多應用場景適配：支持WB（1:500-1:2000）、IHC（1:100-1:500）、ICC/IF（1:200-1:1000），滿足從分子到組織水平的檢測需求。  

- 即用型設計：1mg/ml高濃度溶液可直接使用，避免反復凍融導致的抗體降解。  

- 兼容性擴展：可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯用，實現多標記神經元活動分析。

四、核心優勢

1. 特異性與靈敏度的雙重提升  

- 高親和力結合：通過表面等離子共振（SPR）測定，抗體與Npas4的KD值達10?? M級，可檢測低至0.1ng的重組蛋白。  

- 背景信號抑制：在IHC實驗中，對小鼠睪丸等非表達組織無染色，證明其嚴格的組織特異性。  

2. 批次穩定性與生產可靠性  

- 基因層面一致性：重組抗體的DNA序列恒定，避免雜交瘤細胞突變導致的批次差異。  

- 規模化生產能力：哺乳動物細胞培養系統可實現快速擴產，供貨周期短至2周。  

3. 實驗效率優化  

- 省時省力：無需預實驗優化稀釋度，推薦起始濃度直接適用于大多數實驗條件。  

- 兼容多種檢測平臺：與HRP、Alexa Fluor等標記二抗配合，支持化學發光、熒光顯微鏡及流式細胞術。  

4. 應用領域擴展  

- 神經科學研究：用于神經元活動圖譜繪制、突觸可塑性機制解析及神經退行性疾病模型驗證。  

- 藥物研發：作為靶點驗證工具，評估候選化合物對Npas4通路的調控作用。  

- 高級成像技術：與組織透明化試劑盒（如CLARITY）聯用，實現全腦3D成像。  

五、客戶群體與典型應用案例

1. 核心用戶

- 神經科學實驗室：研究突觸可塑性、學習記憶及神經退行性疾病的機制。  

- 精神疾病研究機構：探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。  

- 藥物研發企業：開發靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。  

- 細胞生物學實驗室：研究神經元活動誘導的基因表達動態變化。  

2. 代表性實驗方案  

- WB檢測神經元激活：  

 - 樣本：小鼠海馬組織裂解液（35μg蛋白/泳道）。  

 - 條件：抗體稀釋1:1000，4℃孵育過夜，HRP標記二抗1:5000，ECL顯影曝光30秒。  

 - 結果：在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶，KO小鼠無信號。  

- IHC定位Npas4表達：  

 - 樣本：大鼠腦冠狀切片（4%多聚甲醛固定）。  

 - 條件：抗體稀釋1:200，37℃孵育2小時，DAB顯色后蘇木精復染。  

 - 結果：特異性染色集中于海馬CA1區神經元細胞核，背景極低。  

- IF檢測原代神經元激活：  

 - 樣本：體外培養的小鼠皮層神經元（經KCl刺激30分鐘）。  

 - 條件：抗體稀釋1:500，與MAP2抗體共染，Alexa Fluor 488標記二抗，激光共聚焦顯微鏡觀察。  

 - 結果：Npas4信號與MAP2陽性神經元共定位，且刺激組熒光強度顯著高于對照組。

六、訂貨信息與技術支持

1. 產品規格與價格  

- 100μl裝：AS-AB18A-100

- 300μl裝：AS-AB18A-300

- 定制服務：提供HRP、Biotin等標記偶聯抗體，及大包裝批量采購優惠。  

2. 訂購流程  

-供應商：上海起發

七、總結

Anti-Npas4重組兔單克隆抗體（AS-AB18A系列）憑借重組技術的精準性、嚴格的KO驗證及多場景兼容性，成為神經科學研究的工具。其高特異性、批次穩定性及實驗效率，不僅解決了傳統抗體的痛點，更助力研究者在神經元活動機制、神經退行性疾病及藥物研發領域取得突破性進展。選擇該抗體，即選擇了可靠、高效、前沿的實驗解決方案。  

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