Cisbio Bioassays公司 HTRF 技術

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Cisbio Bioassays公司所銷售的基于HTRF技術的產(chǎn)品包括：IP1, cAMP, Cellul’erk 以及Tag-lite™細胞表面受體平臺。這些業(yè)務將會通過IBA集團旗下的IBA中國分公司（www.htrf-china.cn）來操作。為了在亞洲市場拓展應用于癌癥診斷和治療方面的放射藥物產(chǎn)品、儀器和方法, IBA集團于2007年建立了IBA中國公司   上海起福公司專注于為制藥和生物技術實驗室提供相關商品。 價格查詢請上www.78bio.com

HTRF 技術介紹

HTRF（均相時間分辨熒光）是用來檢測均相體系中待測物的一種zui常用的方法，是用來研究藥物靶標的理想的平臺。這種技術結合了熒光共振能量轉移（FRET） 和時間分辨技術（TR）。在TR-FRET實驗中，當供體和受體相離很近時，在供體和受體之間會有熒光共振能量轉移而產(chǎn)生信號。采用雙波長檢測能夠顯著減小緩沖液和培養(yǎng)基的干擾，zui終的信號跟產(chǎn)物形成的量成比例。

HTRF技術被廣泛應用于基于細胞實驗和生化實驗的藥物研發(fā)的不同階段，從實驗開發(fā)，lead到hit，高通量篩選（HTS），到臨床前研究。這是一種很靈敏且穩(wěn)定的技術，可以使用384和1536孔板。自從10年前HTRF技術進入藥物研發(fā)領域以來，研究者采用該技術加快了很多基于抗體的研究，包括GPCR（配體結合，受體二聚化，cAMP 和IP-1 的檢測，以及磷酸化ERK的定量）, 激酶，細胞因子和生物標志物，生物過程（抗體和蛋白生產(chǎn)），以及蛋白和蛋白，蛋白和多肽，蛋白和DNA/RNA相互作用的實驗。HTRF技術也可以取代大部分ELISA，因為HTRF具有同等的檢測范圍和檢測極限，而且更節(jié)省實驗時間，并且不需要洗板的步驟。

HTRF也是基于TR-FRET的化學技術,但它的許多特點把它與其他TR-FRET產(chǎn)品區(qū)分開來。其中一個特點就是由于使用了鑭系元素，從而具有非常長的半衰期（銪和鋱），鑭系元素與絡合的穴相結合，這種結合的穴狀物與其他所有TR-FRET產(chǎn)品使用的螯合技術相比能增加實驗的穩(wěn)定性，另外使用化的比值測量能矯正干擾因素。其他HTRF ®技術的特點包括：

• 均質性（不需要洗板）
  
• 低背景
  
• 實驗體積的小型化很簡捷
  
• 化合物和培養(yǎng)基的干擾小
  
• 對一些添加劑如DMSO和EDTA的耐受性
  
• 與許多讀扳機相兼容

總體而言，HTRF在生物分子檢測和定量方面是相當靈敏和穩(wěn)定的技術，可以廣泛應用于藥物研發(fā)領域.

詳細技術特點

穴與螯合物
穴的形成是將一個陽離子納入到一個立體籠中。籠能收集光然后將能量轉移到核心的鑭系元素。這個大環(huán)的這些性質有利于跟鑭系元素緊密相連，這種不可破的連接會形成異常穩(wěn)固的復合體。這種穴結構能抵抗一些特殊的實驗條件如大量存在的陽離子（Mg2 +和Mn2 +等），螯合物（EDTA），溶劑或者溫度。從HTRF 能應用到臨床診斷（TRACE®技術和Kryptor®工作站技術）就能看出它也適用于濃度高的血清（50%）。在讀板前或者孵育時加入氟離子能增強實驗對大量化合物的抗干擾性。

以鈾氨基丁三醇穴（TBP鈾）為例，雙吡啶的一部分增加活化參數(shù)達到大約25-30kcal/mole 的ΔG*。因此穴結構分子能被用于惡劣的化學條件，例如在固相肽類合成過程中，穴結構分子在存在的固相化學和反相色譜中非常穩(wěn)定，而不用考慮鈾會從籠中分離。作為對比的是螯合物躍遷很容易達到0-10 kcal/mole的ΔG*，例如羧酸根部分質子化。這就解釋了為什么螯合物跟穴結構分子不一樣，在酸性介質中不穩(wěn)定，稀有金屬離子容易被介質中的離子如錳置換。

時間靈活和實驗安全
如果儀器壞了，在一段時間之后仍然可以讀板。HTRF結果能持續(xù)7天以上保持穩(wěn)定且較大的實驗窗口。

動力學研究
穴沒有光漂白性，多次讀數(shù)后信號沒有損失。因此能按照需要的次數(shù)去讀，這就給許多實驗的動力學檢測提供了可能。

靈活的實驗模式
許多化學和生物添加劑，如帶血清的培養(yǎng)液，牛血清白蛋白，二甲基亞砜，去污劑，酶的淬滅劑（EDTA），對實驗測量沒有干擾因而給實驗提供了很大的靈活性。