熒光金---神經(jīng)逆行示蹤檢測(cè)COA

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Hydroxystilbamidine (FluoroGold)

Catalog #: 780000

Selection:20 mg

Price：2600

Product Description

Hydroxystilbamidine has been used extensively as a retrograde tracer for neurons and also a histochemical stain. Please also see hydroxystilbamidine 4% in H₂O (80023), which is a more convenient, ready-to-use form.

• λ_Ex/λ_Em = 361/536 nm

• Yellow solid soluble in water

• Store at 4°C and protect from light

• C₁₈H₂₄N₄O₇S₂

• MW: 473

FluoroGold is a trademark of Fluorochrome, LLC.

MSDS (PDF): MSDS 80014

相關(guān)應(yīng)用資料：

神經(jīng)示蹤劑應(yīng)用背景：神經(jīng)示蹤劑常用于闡明神經(jīng)系統(tǒng)的解剖。示蹤劑可以順行，從軸突到胞體；也可以逆行，從胞體到軸突。在這些示蹤劑的幫助下，可以確認(rèn)軸突的起源細(xì)胞，他們支配某種特定結(jié)構(gòu)形成；也可以鑒別從某一特定的神經(jīng)元出來(lái)的軸突投射的目標(biāo)位置。

Fluoro-GoldTM 熒光金（神經(jīng)逆行示蹤檢測(cè)）

產(chǎn)品背景

Fluoro-GoldTM是當(dāng)今世界上應(yīng)用zui普遍和非常有效的神經(jīng)逆行示蹤劑，F(xiàn)luorogold也稱(chēng)為羥脒替（hydroxystilbamidine），是Fluorochrome, LLC.公司的專(zhuān)有產(chǎn)品，于1985年開(kāi)始范圍內(nèi)銷(xiāo)售。

Fluoro-GoldTM antibody （抗體）為Fluorochrome, LLC.特別開(kāi)發(fā)的高靈敏度抗體，能夠大幅度增強(qiáng)Fluorogold的可見(jiàn)度。Fluorochrome, LLC.公司1998年引進(jìn)該抗體以來(lái)，不僅大量文獻(xiàn)研究證實(shí)其有效性，而且成為行業(yè)檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1）Fluoro-Gold（熒光金）的產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

﹄ 極其強(qiáng)效的神經(jīng)逆行熒光示蹤劑，靈敏度高且結(jié)果穩(wěn)定；

﹄ 不會(huì)非特異性結(jié)合傳代中未損傷的纖維；

﹄ 不會(huì)滲出逆行標(biāo)記的神經(jīng)元；

﹄ 標(biāo)記神經(jīng)元存活周期廣，1天或者高于1個(gè)月；

﹄ 可用壓力注射或者離子透入（iontophoresed）的方法將染料導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)；

﹄ 與zui常用的其他幾種神經(jīng)解剖技術(shù)相兼容，比如免疫熒光術(shù)（IF），免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC），放射自顯影技術(shù)，過(guò)氧化物酶免疫組化（HRP-IHC）,石蠟包埋和其他逆行熒光示蹤劑

﹄ 操作簡(jiǎn)便安全，保質(zhì)期長(zhǎng)；*可靠的材料來(lái)源；

2）Fluoro-Gold（熒光金）與Fluoro-Gold抗體結(jié)合使用的優(yōu)勢(shì)：

﹄ 大幅度增強(qiáng)熒光金標(biāo)記的可視度；

﹄ 允許更的解剖標(biāo)測(cè)

﹄ 顯示相當(dāng)細(xì)微的解剖結(jié)構(gòu)包含樹(shù)突，軸突和軸突末梢

應(yīng)用圖片：

Left: VTA (40X) after Fluoro-Gold injection in the accumbens.  Antibody is at 1/100,000.

Right: Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

產(chǎn)品使用

1）Fluoro-Gold（熒光金）單獨(dú)標(biāo)記技術(shù)

﹄ 溶解體系（vehicle）：溶于蒸餾水，0.9%生理鹽水，或溶于0.2M中性磷酸鹽緩沖液配置成懸浮液

﹄ 染液濃度：有效染色濃度范圍1-10%。初次實(shí)驗(yàn)推薦使用濃度4%。 如果注射部位發(fā)生意外壞死，或者標(biāo)記過(guò)于密集，可降低濃度至2%。Fluoro-Gold分子量為532.6 daltons。

﹄ 注射方法：壓力注射；離子透入；或者晶體注入；

﹄ 術(shù)后存活時(shí)間：好的逆行神經(jīng)示蹤標(biāo)記一般在術(shù)后2天~2個(gè)月內(nèi)觀察到。通常情況下術(shù)后的存活周期是3~5天。在染料不會(huì)向胞外擴(kuò)散的前提下存活時(shí)間長(zhǎng)能夠改善遠(yuǎn)端神經(jīng)末梢的填充。

﹄ 固定：差不多同所有固定方式兼容，或者也可不做固定；常常使用含4%甲醛的中性生理緩沖鹽作為固定劑。注：含高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會(huì)導(dǎo)致熒光淬滅，另外含高濃度（＞1%）戊二醛可能會(huì)加深背景熒光；

﹄ 組化處理：含F(xiàn)luoro-Gold的組織樣本幾乎與所有通用的組化處理技術(shù)兼容，經(jīng)常使用的是固定組織的冰凍切片（20 µm）。另還包含未固定組織的恒冷切片（10 µm）；塑料（0.2-4 µm）或石蠟（3-10 µm）包埋的薄切片；

﹄ 聯(lián)合檢測(cè)：切片進(jìn)一步處理用于第二種標(biāo)志物（marker）的檢測(cè)如放射自顯影，HRP組化分析；免疫細(xì)胞化學(xué)；第二種熒光示蹤劑；熒光素復(fù)染等等。

﹄ 封片，清洗和蓋片：切片通常黏附在明膠包被的載玻片上，風(fēng)干，二甲苯浸漬，然后加入非熒光的DPX塑性封片劑來(lái)蓋片；

﹄ 觀察與拍照：熒光金可直接用熒光顯微鏡觀察，使用寬帶紫外激發(fā)濾光片。顏色：中性pH緩沖液處理組織發(fā)射金色光；酸性pH緩沖液（如pH=3.3）處理組織發(fā)射藍(lán)色；也可以用數(shù)碼拍照或者膠片曝光來(lái)記錄結(jié)果。

2）Fluoro-Gold（熒光金）+ Fluoro-Gold antibody（熒光金抗體）的組合標(biāo)記技術(shù)

﹄ 抗體特性：兔多克隆（100 µl，1:100 dilutionl），BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)稀釋500~1,000×,與 Vector elite kit結(jié)合使用大概可做300~1000張切片。

﹄ 抗體使用：熒光金注射入動(dòng)物體內(nèi)之后，漂片（以灌注4%甲醛的大鼠腦組織切片，30 µm為例）在Fluoro-Gold 抗體工作液中4度孵育18小時(shí)后，清洗，然后用生物素化GAR（Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody ，1:1000，Cat#：BA-1000）室溫孵育1h，之后清洗。 切片再用Avidin/Biotin（1:1000， vector， Cat#:PK6100）孵育1h，之后轉(zhuǎn)入DAB顯色底物孵育6 mins（Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H2O2）。切片zui后進(jìn)行清洗，組織黏合，干燥，脫水和蓋片。