78PEI MAX 40K轉(zhuǎn)染試劑

??產(chǎn)品概述

化學(xué)名：線性聚乙烯亞胺，線性PEI，聚乙烯亞胺，線性，MW 40000，轉(zhuǎn)染級(jí)、線性聚乙烯亞胺（分子量40000）

訂貨號(hào)： 78pei40000

規(guī)格：100mg/500mg/5g

品牌：78bio/BIOHUB

CAS：49553-93-7

分子量：40,000（~22,000自由基）

溶于：水          

不溶于：常用有機(jī)溶劑（乙醇，丙酮，四氫呋口南）

外觀：白色至灰白色自由流動(dòng)的固體

處理：手套和通風(fēng)櫥

儲(chǔ)存：在室溫下避光干燥儲(chǔ)存

介紹：

1.78PEI MAX 40K轉(zhuǎn)染試劑（在游離堿中也稱為PEI 22K）是一種功能強(qiáng)大，值得信賴且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。在HEK293和CHO大多數(shù)表達(dá)系統(tǒng)中，PEI MAX都能提供穩(wěn)定的高表達(dá)（96孔板至100L生物反應(yīng)器）。現(xiàn)在每年有更多的研究人員和公司來(lái)使用PEI MAX進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，因?yàn)橄鄬?duì)于大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑而言 PEI MAX既能等到穩(wěn)定的高表達(dá)又能使轉(zhuǎn)染成本降低少40%。

2.78PEI MAX 40K轉(zhuǎn)染試劑比更PEI 25K易于使用，并且比PEI 25K有更高的轉(zhuǎn)染效率，通常PEI 25K轉(zhuǎn)染過(guò)程通常需要幾個(gè)小時(shí)才能完成準(zhǔn)備，而PEI MAX 40K可在兩小時(shí)內(nèi)完成整個(gè)轉(zhuǎn)染過(guò)程。另外，PEI 25K含有4-11％的殘留丙酰基，這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合，而PEI MAX 40K的丙酰基易脫落，意味著PEI MAX每批產(chǎn)品的性能更加穩(wěn)定。

??產(chǎn)品配置方法

1. 儲(chǔ)存液配制（1 mg/mL）  

-材料：78PEI40000粉末、超純水、1N NaOH、0.1 μm濾膜  

-步驟：  

 ① 取1g粉末溶于900 mL超純水，磁力攪拌至溶解；  

 ② 滴加1N NaOH調(diào)節(jié)pH至6.9-7.1（若超限則用1N HCl回調(diào)）；  

 ③ 定容至1L，0.1 μm濾膜過(guò)濾除菌；  

 ④ 分裝后4℃保存，液體有效期6個(gè)月，凍干粉有效期1年。  

2. 工作液配制  

- 按1 μg DNA : 1-5 μL 78PEI40000儲(chǔ)存液的比例稀釋（推薦初始比例1:3）；  

- 使用無(wú)血清培養(yǎng)基（如Opti-MEM）稀釋DNA和PEI，室溫靜置10-25分鐘形成復(fù)合物。

??轉(zhuǎn)染操作流程

（一）貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染  

1.細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前24小時(shí)接種細(xì)胞，密度達(dá)70%-80%匯合度，更換為含5%血清的培養(yǎng)基；  

2.復(fù)合物孵育：將DNA-PEI復(fù)合物逐滴加入培養(yǎng)皿，輕柔渦旋后孵育4-6小時(shí)；  

3.換液與檢測(cè)：更換新鮮培養(yǎng)基，7小時(shí)后可檢測(cè)基因表達(dá)，24小時(shí)后傳代并添加篩選藥物。  

（二）懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染  

1.細(xì)胞準(zhǔn)備：調(diào)整細(xì)胞密度至1×10? cells/mL，搖床培養(yǎng)2-4小時(shí)；  

2.復(fù)合物添加：將DNA-PEI復(fù)合物直接滴加至搖瓶，持續(xù)振蕩培養(yǎng)24-72小時(shí)；  

3.擴(kuò)增優(yōu)化：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后可稀釋細(xì)胞（1:2-1:5）以提高蛋白產(chǎn)量。  

?關(guān)鍵注意事項(xiàng)  

1.溶解要求：  

  - 必須充分溶解，未溶解顆粒會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降；  

  - 建議使用NEST 5 mL/14 mL離心管處理大體積溶液。  

2.pH控制：  

  - 初始溶解時(shí)pH需精確調(diào)節(jié)至6.9-7.1，過(guò)高或過(guò)低均影響復(fù)合物形成。  

3.細(xì)胞狀態(tài)：

  - 推薦使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，避免消化過(guò)度損傷細(xì)胞膜。  

4.毒性控制：  

  - 高密度細(xì)胞（>90%匯合度）需降低PEI用量（推薦比例1:1）。  

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